【＞】黄枝油杉遗传多样性的ISSR分析

中国对虾遗传多样性的ISSR分析谢伟玲，柴胜峰，魏晓（1中国科学院广西植物学研究所岩溶植物保护与恢复生态系统广西重点实验室，桂林541006）使用ISSR用分子标记分析了中国对虾自然种群的遗传多样性，用12种ISSR引物在物种水平上扩增了125个位点，多态性位点（PPL）的百分比为10％，香农信息多样性指数为0.。 ] 4177，Nei的基因多样性指数H）为0. 2666。在种群水平上，多态性位点（PPL）的百分比在71.20％〜92.00％之间，平均值为8 0. 69％。香农信息多样性指数I）在0.中。 ] 3273〜0. 3886，平均值为0. 3548，Nei的基因多样性指数H）在0. 2139〜0. 2478之间，平均值为0. 2291多样性。 Nei的遗传多样性分析（Gst = 0. 1）和AMOVA分析（Φst=1.91％）表明，遗传变异主要存在于群体中，群体之间的遗传分化程度较低，群体间的基因差异很大。 （Nm =2.9890> 1）（r = 0. 4567，P = 0. 0610＞ 0. 05）。ISSR分子标记中文图书馆分类号：Q755文件标识码：物品编号：卡氏假单胞菌遗传多样性的ISSR分析谢伟玲，柴胜峰，姜云生，唐建民，陈宗友，邹蓉，魏晓（1广西植物保护重点实验室广西壮族自治区广西植物研究所和中国科学院桂林喀斯特地带的“恢复与生态”，桂林541006)摘要：用ISSR标记研究了7个自然种群的遗传多样性十二种ISSR引物产生了125个基因座，在物种水平上，多态性基因座（PPL）的百分比为10 [k] 1] 00％，香农信息指数（I）为0. 4177，Nei基因多样性指数（H）为0. 2666.。在种群水平上，多态性位点的百分比为71.20％〜 92.00％，平均值为8 0. 69％，香农信息指数（I）为0. 3273〜0. 3886，平均值0. 3548和Nei基因多样性指数（H）为0. 2139〜0. 2478，其物种和种群水平的平均值0. 2291.Caleta calcarea具有较高的遗传多样性。 Nei的遗传多样性分析（Gst = 0. 1433)和AMOVA分析（Φst= 17.91％）显示，卡尔塔假单胞菌的遗传变异主要发生在种群内，种群间的遗传分化程度较低。种群之间的基因流（Nm）高（2.9890)。Mantel分析表明，Keteleeria calcarea自然种群的遗传距离与其地理距离没有显着相关性（r = 0. 4567，P =0.0610＞ 0. 05关键词：卡尔卡雷克氏菌，ISSR标记，遗传多样性，遗传结构，保护策略凯卡莱克氏菌（Petaceae）属平（Keteleeria），是一种常绿的常绿大树植物，是一种稀有和濒危的独特树种于2005年传入中国，也是第三纪的古代原始树种，主要分布在中国的贵州，湖南和广西等地区，李书刚，沉艳等，秦海宁，2010，平塘，独山，江永，荣安，桂林等在560〜1100m石灰岩山坡上的岩石地面，山坡或岩石上生的一些地方。

由于根系发达，皮层发达，因此具有强大的渗透力并能储存更多的水，因此它可以承受石山的干旱栖息地，并可以用于石山的绿化。彭少林2003）;它的材料牢固，木材纹理笔直，树干笔直且耐水浸，可用于造船，建筑，家具等。 2008）。此外，由于其美丽的树形，茂密的枝条和雄伟的高大挺拔，可作为具有很高生态价值的观赏树种傅立果1989）。目前，关于黄杉杉木的研究报道很少姜百胜等。 2008），资源分配的状态（沉艳等，何道航等2006），傅志宏2014）等。ISSR是一种基于PCR技术并使用简单重复的分子标记技术由Zietkiewicz等人于1994年开发，等[199]4）提出，它具有多态性高，产物特异性强，DNA用量低，稳定性好等优点，已广泛用于遗传构建。地图范福华等，2010张林等，201种质资源鉴定宋继宣，2010郑路，2007、品种关系和分类研究范福华等.2010梁景霞等2008、分析遗传多样性研究郑璐，2007梁敬霞等，2008，等。资源保护2014年9月至12月，在桂林临桂县二塘沉桥村，桂林恭城县三江三寨村举行，贺州市富川县邮寄镇；河南独木村县，河南省南丹市，河池；从贵州省平塘县里湖乡怀里村，里湖乡，贵州平塘县Z米镇，姚邦乡，贵州省独山县等地收集了7个生长良好，健康的中华对虾种群。

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从每个种群中抽取27-33个人，迅速将新鲜叶子放入密封袋中，快速干燥并用硅胶固定，然后将其带回实验室进行分析。广西植物研究所研究员姜云生鉴定了采集到的样品，并确定它们是黄枝杉木。每个采样点的自然概况如表1所示。表1卡尔卡里亚乳杆菌群落种群林分的调查采样位置位置纵横比坡度（°）海拔（m）纬度经度经度样本量桂林恭城三江三寨村，桂林恭城WS5067025°50′26″ 110°05′47″ 31临桂LG）桂林临桂县WS4016025° 12′47″ 110°11′51″ 33富川FC）贺州市富川县邮寄镇李尾村ES3533425°02'24″ 111°18′47″ 27荣安县独木村柳州WS5048025°01′46″ 109°34′50″ 29南丹ND）南丹县里湖乡河池怀里村WS4069725°07′07″ 107°42′25″ 33独山DS）贵州省独山县瑶邦乡WS6085525 °23′40″ 107°30′50″ 32贵州省平塘县）ES3077125°41′31″ 107°22′41″ 331.2.1平塘县Z米镇ES3077125°41′31″ 107°22′ 41” 331.2.1 CTAB法提取中华白total总DNA，但在水浴前用-20℃预冷的丙酮洗涤两次（戴文娟，2006）。

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使用浓度为0. 8％的琼脂糖凝胶电泳来检查DNA的质量和完整性。 DNA的纯度和浓度用NanoDrop 2000c超微型分光光度计进行测试，并保存在-20℃的冰箱中以备后用。1.2.2 ISSR扩增和检测从100个ISSR引物中筛选出12个扩增效果好，重现性好且具有多态性的引物（表2）vs. P. chinensis 7）共有218个自然人对一个种群进行ISSR分析：一个25μL的系统，其中包含2.5μL的10x PCR缓冲液，1.5 U的Taq DNA聚合酶，1.0μmol？L-1引物，2.0mmol？L-1 Mg2 +， 0. 10 mmol？L-1 dNTP和30ng模板DNA，其余填充无菌ddH2O组成25μL；扩增程序为94℃预变性5min； 94℃变性30s，53〜58 ℃（不同的引物具有不同的退火温度，请参见表2）退火45s，在72℃延伸90s，以上3个步骤循环50次；最后在72℃7min。PCR扩增产物使用1.5 ％琼脂糖凝胶电泳1-1.5h，用溴化乙锭（[​​k1]5μg？mL- 1）染色20min，照相并用UVP凝胶成像系统保存。表2序列d选择的12种引物的退火温度表2 12种引物的序列和退火温度。顺序顺序Tm值（℃）Tm值退火温度（℃）退火温度UBC834AGAGAGAGAGAGAGAGAGAGA GYT53.957.0UBC836AGAGAGAGAGAGAGAGYAYA53.956. 0UBC840GAGAGAGAGAGAGAGAGAYY53.956. CABCA0CACCA6. 258.0

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